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1、切割質(zhì)粒和目的基因的限制酶必須是同-.種酶，以獲得相同的黏性末端，利于重組質(zhì)粒的構(gòu)建。插入的目的基因只是結(jié)構(gòu)基因部分，其表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入部位前須有啟動子，后須有終止子。

2、通過載體把目的基因片段導(dǎo)入活細(xì)胞。構(gòu)建基因表達(dá)載體也就是把目的基因和載體連接，使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。